MAG-XTRACT

Catálogo: 13-BR500-25

Apresentação: 250 extrações

Transporte: 10-30°C

Armazenamento: 2-8°C

Instrução de Uso

O Kit MAG-XTRACT é recomendado para o isolamento de RNA/DNA a partir de amostras de soro, sangue, plasma, fluidos corporais, vírus, bactérias, suspensões de células de fezes e tecidos biológicos previamente tratados e homogeneizados e de amostras colhidas em cotonetes acondicionados em solução conservante.

A solução de lise que compõe o kit MAG-XTRACT primeiramente libera o ácido nucléico e, em seguida, o RNA/DNA que estará em suspensão na solução serão capturados pelas beads magnéticas. As beads contendo o RNA/DNA são capturadas por um imã. Em uma próxima etapa, os contaminantes são removidos pelo processo de lavagem. Finalmente, o ácido nucleico é dissociado das beads magnéticas e eluídos em tampão.

Componentes do kit:

Lysis Buffer ……………….. 40 mL

Magnetic Beads………… 13 mL

Binding Buffer…………….. 80 mL

Washing Buffer…………… 250mL

Elution Buffer……………… 20 mL

NOTAS:

O kit MAG-XTRACT pode ser utilizado manualmente ou através de equipamentos de extração de ácidos nucléicos automatizados:

*Para uso manual é necessária a aquisição de uma rack magnética para microtubos de 2,0mL.

**Para uso em sistemas automatizados o conteúdo do kit pode ser distribuído nas placas deep well específicas de cada equipamento.

PROCEDIMENTO:

Em um microtubo de 2,0 mL adicionar 150 uL de Lysis buffer e 250 uL de Isopropanol para cada 250 uL de amostra.

Observação:

para aumentar a eficiência da extração pode ser adicionado 10 uL de Proteinase K na concentração de 20mg/mL, com uma etapa adicional de incubação de 65°C por 10 minutos e prosseguir com o protocolo.

Alternativamente pode ser adicionado 10 uL de Beta-mercaptoetanol puro e prosseguir com o protocolo.

Adicionar 100 uL de Magnetic Beads.

Homogeneizar com auxílio de agitador tipo vortex por 10 segundos.

Colocar o microtubo na rack magnética e deixar por alguns minutos até que as beads se prendem na parede do tubo pelo ímã da rack.

Com auxílio de uma micropipeta, aspirar completamente o líquido evitando contato com as beads.

Retirar o microtubo da rack magnética e adicionar 300 uL de Binding Buffer

Homogeneizar com auxílio de agitador tipo vortex por 10 segundos.

Colocar o microtubo na rack magnética e deixar por alguns minutos até que as beads se prendem na parede do tubo pelo ímã da rack.

Com auxílio de uma micropipeta, aspirar completamente o líquido evitando contato com as beads.

Retirar o microtubo da rack magnética e adicionar 400 uL de Washing Buffer.

Colocar o microtubo na rack magnética e deixar por alguns minutos até que as beads se prendem na parede do tubo pelo ímã da rack.

Com auxílio de uma micropipeta, aspirar completamente o líquido evitando contato com as beads.

Repetir este processo de lavagem com o Washing Buffer, do passo 10 a 12, por mais uma vez.

Com o microtubo na rack magnética, aguardar por 5 minutos a evaporação total dos líquidos residuais.

Observação: não deixar mais do que o tempo recomendado, pois as beads poderão ficar aderidas entre si, favorecendo uma perda de rendimento para a etapa posterior.

Retirar o tubo da rack magnética sem resíduos de líquido, adicionar 100 uL do Elution buffer.

Pipetar up-and-down por 5 segundos.

Recolocar o tubo na rack magnética e deixar a solução no mínimo por 1 minuto.

Retirar o líquido com o RNA/DNA extraído e transferir o líquido para um novo microtubo.

O RNA/DNA extraído deverá ser armazenado de 2 a 8oC por até 12 horas.

Após este período é recomendado armazenar a -20oC ou por longos períodos a -80oC.