CARCTERÍSTICAS: É uma solução balanceada com tripsina de origem suína isenta dos íons Cálcio e Magnésio. Ausente de Bicarbonato de sódio. O EDTA presente na formulação atua como agente quelante. que permite o “descolamento” das células de frascos de cultivo e/ou desagregando células entre si através de sua propriedade proteolítica sobre proteínas intercelulares, e ainda alterando a estabilidade das membranas ao quelar o íon cálcio.

APLICAÇÃO: Este tampão é indicado na separação de células de órgãos e/ou tecidos, ou mesmo cultivados em mono-camadas ou camadas múltiplas. Como o processo de descolamento e separação de células é feito geralmente ao microscópio, é possivel controlá-lo, interrompendo a sua ação, através da adição de meio contendo soro animal ou humano.

COMPONENTES E CARACTERÍSTICAS FÍSICOQUIMICAS:
· Tripsina, EDTA, HBSS modificado e bicarbonato de sódio,
· Aspecto: límpido e transparente
· pH: 7,0 + 0,2

CONSERVAÇÃO: Descongelar apenas no momento de uso. Por se tratar de uma enzima proteolítica, ela pode sofrer auto-digestão com diminuição de sua atividade. A alteração para valores mais próximos de 7,9 e sua utilização à 37oC provocam um aumento de atividade, ocorrendo o inverso com diminuição do pH e da temperatura.

PARA REMOVER CÉLULAS DE CULTURAS ADERIDAS AO FRASCO:
1. Remova por inversão ou por aspiração todo o meio do frasco de cultivo.

2. Adicione aproximadamente 0,1 ml/cm2 da solução de Tripsina/EDTA para lavar rapidamente a superfície de células. Essa manobra é rápida e serve para remover o soro remanescente. Pode-se utilizar meio de cultura ou solução  balanceada em maior quantidade, mas sem soro, o que permitirá maior economia da Solução de Tripsina.

3. Adicionar aproximadamente 0,05 mL/cm2 da Solução de Tripsina/EDTA sob a superfície celular e observar ao microscópio. Quando as células adquirirem um aspecto redondo e individualizado, deslocando-se do tubo, pode-se interromper o processo com a adição de 0,2 ml/cm² de meio com soro à 10%. Como o soro possui alfa 1-antitripsina, ele neutralizará a ação da tripsina. Quando se trabalha com monocamadas celulares que ocupam todo o frasco, o descolamento pode ser observado a olho nu e o meio se apresentará como se tivesse uma fina areia. É importante que a neutralização com soro se faça logo após o descolamento da camada celular, uma vez que a membrana, por ser lipo-protéica, sofre a ação proteolítica da tripsina.

4. A seguir, as células são homogeneizadas e contadas para diluição, congelamento, repiques celulares, etc.

PARA REMOVER CÉLULAS DE ÓRGÃOS OU TECIDOS:

1. Lavar bem o órgão ou tecido em meio sem soro.

2. Com o auxílio de uma tesoura de íris, picotar o órgão em pedaços bem pequenos (+1mm).

3. Aspirar todo o sobrenadanete (os pedaços geralmente não flutuam).

4. Adicionar Tripsina/EDTA em volume de 3 a 10 vezes o correspondente do tecido picotado.

5. Agitar lentamente em um Erlenmayer, com o auxílio de um agitador magnético com imã revestido de PTFE e estéril. O tempo de coleta da Tripsina com células pode ser com intervalos de 10, 20 ou 30 minutos.

6. Após o tempo de ação da solução de Tripsina aspirar o sobrenadante e, vertê-los para tubos contendo meio completo com soro à 10%. A proporção será de volume a volume, isto é, para cada 10 ml de sobrenadante, misturar outro ml de meio completo com soro. Veja que a extração de células do Erlenmayer poderá continuar a ser feita, bastando para isso adicionar mais Tripsina/EDTA.

7. Centrifugar por 10 minutos à 1000 RPM os tubos contendo Tripsina com meio completo, desprezar o sobrenadante e adicionar novo meio completo.

8. Homogeneizar e distribuir as células em frascos de cultivo de acordo com a vitalidade e densidade celular desejada

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Armazenamento: 2-8°C
Fórmula Molecular: C3H3NaO3
Peso Molecular: 110.0

Descrição do Produto:
Sinônimos:

α-Ketopropionic Acid Sodium Salt
2-Oxopropanoic Acid Sodium Salt
Pyruvic Acid Sodium Salt

O Piruvato, molécula aniônica do ácido pirúvico, é o produto final da glicólise. Durante esse processo, a glicose converte-se em piruvato, gerando uma molécula de ATP. Nas mitocôndrias de organismos aeróbicos, o piruvato converte-se em acetil-coenzima-A, oxidando-se posteriormente até CO2. Na ausência de oxigênio em quantidade suficiente, o piruvato é metabolizado até lactato. Em organismos anaeróbicos, como as leveduras, o piruvato converte-se em etanol. Na gliconeogénese, o piruvato converte-se em glicose. Outras vias metabólicas incluem a conversão em alanina pela transaminação e em oxalacetato pela carboxilação. O piruvato de sódio é utilizado como componente em meios e caldos de cultura. Sua aplicação na fermentação de Wallen estimula a conversão do ácido oléico para ácido 10-ketoestérico pelo Bacillus sphaericus. Diversos protocolos utilizam o piruvato para conferir estabilidade em células B humanas transfectadas.

Precauções e Recomendações: Recomendado apenas para uso em laboratório, não como droga, ou para uso doméstico ou outras aplicações.

Concentração, Uso e Armazenamento: Este produto é fornecido na concentração de 100 mM (100X concentrada), podendo ser diluído para a concentração de trabalho desejada. Estável por dois anos, desde que armazenado nas condições ideais de temperatura e baixa luminosidade. O piruvato pode polimerizar e perder atividade se as embalagens não forem corretamente fechadas.

Referências:

Biochemistry, 3rd ed., Stryer, L., W. H. Freeman (New York, NY: 1988), pp. 349-394.
Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, Devlin, T. M., ed., Wiley-Liss (New York, NY: 1992), p. 248.
Geshi, M., et al., Effects of sodium pyruvate in nonserum maturation medium on maturation, fertilization, and subsequent development of bovine oocytes with or without cumulus cells. Biol. Reprod., 63(6), 1730-1734 (2000).
Jiang, X., and Doyle, M. P., Growth supplements for Helicobacter pylori. J. Clin. Microbiol., 38(5), 1984-1987 (2000).
Kuo, T. M., et al., Conversion of fatty acids by Bacillus sphaericus-like organisms. Curr. Microbiol., 45(4), 265-271 (2002).
Brielmeier, M., et al., Improving stable transfection efficiency: antioxidants dramatically improve the outgrowth of clones under dominant marker selection. Nucleic Acids Res., 26(9), 2082-2085 (1998).
The Merck Index, 12th ed., Entry# 8205.

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Código: BR30023-05

Quantidade: 500 mL

Armazenamento: 2 a 8 graus

Instruções de Uso

1. Descrição O meio RPMI-1640, desenvolvido por Moore e colaboradores (1969) no Roswell Park Memorial Institute, é uma solução que se baseia no meio RPMI-1630. Ele utiliza um sistema de tamponamento com bicarbonato e concentrações ajustadas de aminoácidos essenciais e vitaminas para promover o crescimento celular. Este meio tem sido amplamente utilizado na cultura de células humanas normais e neoplásicas (originárias de tecidos tumorais). Quando devidamente suplementado, demonstra grande versatilidade, sendo capaz de suportar o crescimento de vários tipos de culturas celulares, incluindo linfócitos humanos frescos, para ensaios de estimulação em 72 horas com fito-hemaglutinina (PHA).
2. Atividade O meio RPMI-1640 é uma solução nutritiva para culturas celulares.
3. Armazenamento Manter entre 2°C e 8°C.
4. Aplicações É indicado para cultivo de células humanas e de outros animais. Por não conter timidina em sua composição, é frequentemente usado para sincronização na divisão celular.
5. Características

• Solução cristalina na concentração de uso (1X)
• pH a 25°C (com NaHCO3): 7,2 ± 0,5
• Osmolaridade (com NaHCO3): 290 ± 5%

Observações: Se as condições mencionadas não forem mantidas, podem ocorrer alterações como mudanças de cor, granulação, insolubilidade, variação de pH e incapacidade de manter a integridade celular sob condições normais.

alterações do tipo:

• Mudanças de cor;
• Granulações;
• Insolubilidade;
•  Alteração de pH;
• Incapacidade de manter a integridade celular sob condições normais.

Composição do meio RPMI-1640:

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Quantidade: 500g

Código: BR0025-05

Armazenamento: Temperatura ambiente

Descrição:

A glutamina é um aminoácido não essencial, cujo papel no metabolismo proteico e no transporte de nitrogênio entre diversos órgãos, tem sido muito pesquisado, principalmente quanto à possibilidade de se tornar essencial em casos de demanda aumentada. Esse aminoácido é encontrado em concentrações relativamente altas em diversas células de mamíferos, quando pode funcionar como captador de amônia e doador de nitrogênio para a síntese de vários compostos, tais como nucleotídeos, mucos sacarídeos e aminoácidos.

Trata-se de um cristal branco ou pó cristalino com um odor característico. Prontamente solúvel em água e muito frugalmente solúvel em etanol.

A glutamina é o aminoácido mais abundante no sangue, correspondendo a um terço do nitrogênio circulante sob a forma de aminoácidos. Sua concentração varia de 600 a 800 mM e funciona como veículo para o transporte de nitrogênio, que irá dar suporte à síntese de uréia no fígado e de amônia no rim. Estudos demonstraram por diferença de concentração artério-venosa, que uma quantidade significativa de glutamina é absorvida pelas vísceras drenadas pelo sistema porta. Diversos estudos têm demonstrado que a mucosa do intestino delgado é a principal responsável por essa absorção. Outros trabalhos demonstraram o papel fundamental desempenhado pelo fígado no metabolismo desse aminoácido, sendo capaz de funcionar como consumidor ou produtor de glutamina, de acordo com as necessidades de diversos processos fisiológicos ou patológicos.

A concentração de glutamina no sangue cai significativamente em doenças graves, levando a um estado de depleção acentuada desse aminoácido. Pode ser observada uma diminuição de até 75 % na concentração intracelular de glutamina no músculo estriado de pacientes sépticos, sendo essa diminuição correlacionada à mortalidade.

As células epiteliais da mucosa colônica utilizam como fonte energética primária, ácidos graxos de cadeia curta, principalmente os ácidos acético, propiônico e butírico. Esses são formados pela fermentação bacteriana anaeróbia de fibras residuais contidas no bolo fecal. Em segmentos derivados do cólon, a ausência do bolo fecal impede essa formação e sua conseqüente absorção e utilização pelas células epiteliais. Nessa situação, a glutamina, que é um substrato energético secundário para essas células, passa a ser primordial, podendo ser utilizada preferencialmente à glicose como fonte energética.

Estudos experimentais recentes têm demonstrado que a glutamina pode ser um elemento com atividade energética e trófica importante para o cólon submetido a situações de estresse, como é o caso de segmentos derivados. Esses segmentos apresentam atrofia da parede, principalmente às custas do epitélio, tendo o emprego de glutamina evitado essas alterações.

De modo semelhante, segmentos colônicos submetidos à radiação, apresentam uma diminuição do seu conteúdo de colágeno, com conseqüente diminuição da pressão de ruptura e maior risco de deiscência, em anastomoses neles realizadas. A suplementação de glutamina nesses animais foi capaz de atenuar significativamente esses efeitos da radiação(1).

Propriedades:

A quebra do aminoácido durante a cultura celular é dependente do pH, da temperatura e da presença de vários moléculas aniônicas. A deaminação da L-glutamina ocorre em condições ácidas e básicas e significativamente mais rápida na presença de fosfato e/ou bicarbonato.

Usos e Aplicações:

Este aminoácido pode ser utilizado como suplemento no cultivo de células eucarióticas, na concentração de 200 mM.

Obs.: Produtos contendo L-glutamina podem também potencializar o crescimento de hibridomas, células CHO e outras células de mamíferos em cultura livre de soro.

Referências bibliográficas:
1. LOPES, P.F. Efeitos da glutamina sobre a parede intestinal e sua aplicabilidade potencial em coloproctologia. Rev Bras Coloproct, 2005;25(1):75-78.
2. BATISTUZZO, J.A.O., ITAYA, M., ETO, Y. Formulário Medico Farmacêutico. 3ed, São Paulo: Pharmabooks, 2006.
3. ANFARMAG. Manual de equivalência – 2ª edição. São Paulo. 2006.

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• Código do produto: BR30237-01
• Apresentação: 100 mL
• Armazenamento: 2 – 8ºC

O tampão de HEPES é fornecido como solução líquida na concentração de 1,0 M. Devido à sua elevada capacidade tamponante, o HEPES é indicado em diversas concentrações para a suplementação de cultivos celulares.

Aplicações: Este reagente é utilizado como tampão suplementar para cultivo celular, fornecendo condições ideais para a manutenção de culturas de células in vitro.

Informações sobre proteção especial: É recomendado o uso de equipamentos de proteção para os olhos, luvas e máscaras ao manipular esta solução.

Este produto é destinado apenas para fins de pesquisa e não deve ser utilizado para fins terapêuticos em humanos.

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Descrição do Produto:
HEPES é uma substância química que atua como agente tamponante ou buffer, largamente utilizada em cultura celular, pois mantém o pH fisiológico dos cultivos in vitro.
HEPES é recomendado para proteção de soluções e enzimas das mudanças de pH induzidas pelo congelamento.
Niveis de fototoxicidade têm sido relatados quando este produto é exposto a fontes de energia solar, por isso é altamente recomendável proteger o HEPES o máximo possível da luminosidade.

Sinônimos:

• 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid;
• “Good” buffer;
• HEPES, Free Acid

Peso Molecular Weight: 238.31
Fórmula química: C₈H₁₈N₂O₄S

Propriedades físico-químicas:
Aparência: pó branco
Odor: sem odor definido
Solubilidade: 40 gramas em 100g de água.
Ponto de fusão: 234ºC – 238ºC

Armazenamento/Estabilidade
Estável entre 10 – 30 ºC desde que protegido da luminosidade.

APLICAÇÕES:
HEPES tem sido descrito como um dos melhores tampões disponível para os propósitos de pesquisa biológica. Trata-se de uma molécula zwitteriônica, e os valores de pH para sua ação tamponante estão entre 6,8 – 8,2. HEPES tem sido utilizado em enorme variedade de tampões para as mais variadas aplicações, entre as quais, trabalhos com cultura celular.

A capacidade tamponante mais efetiva encontra-se entre 10 – 25 mM. A saber sua capacidade tamponante fornece estabilidade nos cultivos celulares quando estes são incubados em 37ºC.
Após a adição do HEPES aconselha-se ajustar o pH com NaOH ou HCl.
O HEPES é conhecidamente superior quando comparado com o NaHCO₃ no que diz respeito ao controle de pH, em cultivos de órgãos.

Aconselha observar os seguintes cuidados quando do uso do HEPES em trabalhos com proteínas, pois pode afetar os resultados nos ensaios de detecção protéica pelo método de Folin. Já na detecção protéica a traves do método de Biuret, os resultados são mais confiáveis, pois os valores não são alterados.

O tampão HEPES pode ser preparado por diversas metodologias, sendo que ele deve ser adicionado na água, e logo após titulado com NaOH ou KOH até o pH desejado. Para melhor desempenho e qualidade das soluções aconselha-se filtrar em 0,1 micra. Deste modo a qualidade do tampão está garantida.

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DESCRIÇÃO:
Suplemento concentrado para otimização do rendimento e crescimento celular.
Cell Growth Solution é um suplemento sintético que pode ser adicionado diretamente nos meios de cultivo para potencializar o desempenho do meio e o rendimento das células. Adicionado em concentração similar à L-glutamina, as células em cultivo se adaptam sem problema algum. A adição de Cell Growth Solution não afeta os protocolos e condições do cultivo. O Cell Growth Solution elimina os problemas associados com a degradação de L-Glutamina e aumento de níveis de amônia nos meios de cultura durante o processo de incubação e crescimento celular.
Cell Growth Solution melhora a eficiência de crescimento e o desempenho de sistemas de cultura de células. É altamente solúvel em meios e soluções aquosas e é estável ao calor. É fornecido como uma solução na concentração 200 mM (100X) em NaCl 0,85%, estéril e testado para endotoxinas e Mycoplasma.
VANTAGENS:

• Melhora a estabilidade do meio,
• Inibe os efeitos adversos de resíduos de amônia, prejudiciais às células,
• Melhora a potencia de proliferação celular.

MODO DE USO:
Recomenda-se adicionar o volume necessário ao meio de cultivo, de modo similar à concentração
equimolar da L-Glutamina no meio de cultivo utilizado, isto é se o meio requer 2,05 mM de L-Glutamina, adicione a mesma concentração do Suplemento; veja tabela a seguir:

Concentrações diferentes poderão ser acrescidas desde que os ensaios com os melhores resultados sejam padronizadas e estabelecidas no laboratório.
REFERÊNCIAS:

1. Hassell T, Gleave S, Butler M (1991) Growth inhibition in cell culture. Appl Biochem Biotechnol 30:29–41.
2. Yang M, Butler M (2002) Effects of ammonia and glucosamine on the heterogeneity of erythropoietin glycoforms. Biotechnol Prog 18:129–138.
3. Christie A, Butler M (1994) Growth and metabolism of a murine hybridoma in cultures containing glutamine-based dipeptides. FOCUS ™ 16:1, 9.

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