Reagentes para Extração e Purificação de RNA
Código: 13-BR850-50
Apresentação: 50 extrações
Instruções de Uso
1. Uso Pretendido
Os reagentes utilizam colunas de sílica (cartuchos/filtro) para extração e purificação de RNA. Recomendados para amostras de:
- Sangue total
- Plasma
- Soro
- Urina
- Culturas de células
- Amostras coletadas via swab nasofaríngeo
2. Características do Produto
- Sistema genérico baseado em colunas de sílica de alta capacidade.
- Compatível com diagnóstico in vitro (qPCR, RT-qPCR).
- Inclui Proteinase K para lise de proteínas e Carreador de RNA para otimização.
Composição do Produto (50 extrações):
Componente | Volume | Quantidade |
---|---|---|
Hemalise-RBC 10X | 9,0 mL | 1 |
Carreador de RNA liofilizado | – | 1 |
Proteinase K (PK) liofilizada | – | 1 |
Diluente PA/PK | 1,0 mL | 1 |
Tampão de Lise | 20,0 mL | 1 |
Tampão de Lavagem A | 16,5 mL | 1 (concentrado) |
Tampão de Lavagem B | 9,0 mL | 1 (concentrado) |
Tampão de Eluição | 2,5 mL | 1 |
Colunas de Sílica | – | 50 unidades |
Tubos Coletores | – | 50 unidades |
Especificações:
- Alta eficiência com amostras respiratórias, sangue, e meios de transporte.
- RNA purificado adequado para aplicações moleculares.
Equipamentos Necessários (não fornecidos):
- Centrífuga (20.000 x g ou 14.000 rpm)
- Micropipetas (1-1000 µL) e ponteiras descartáveis com filtro
- Vórtex
- Bloco de aquecimento (56°C), banho-maria ou estufa
- Etanol absoluto (95-100%)
- Tubos tipo Falcon e microtubos
3. Preparo dos Reagentes
Proteinase K: Diluir com 500 µL do Diluente PA/PK. Armazenar a -20°C após reconstituição. Usar 10 µL por extração.
Carreador de RNA: Diluir com 250 µL do Diluente PA/PK. Usar 5 µL por extração.
Hemalise 1X: Diluir 1 parte de Hemalise-RBC 10X em 9 partes de água ultrapura.
Tampões de Lavagem: Adicionar etanol absoluto antes do uso:
Componente | Etanol a adicionar | Volume Final |
---|---|---|
Tampão de Lavagem A | 13,5 mL | 30,0 mL |
Tampão de Lavagem B | 21,0 mL | 30,0 mL |
4. Armazenamento e Transporte
- Temperatura ambiente (10-30°C).
- Estáveis até a data de validade na embalagem.
- Para precipitados nos tampões, aquecer a 55-65°C até dissolução completa.
Validade: 12 meses.
5. Segurança
- Uso exclusivo por profissionais treinados.
- Equipamentos de proteção individual são obrigatórios.
- Ambiente de laboratório controlado.
- Não usar componentes danificados ou vencidos.
- Trabalhar em fluxo laminar para evitar contaminações cruzadas.
6. Procedimento Geral
- Preparo da Amostra:
- Sangue total: 200 µL + 1,8 mL de Hemalise 1X.
- Urina: Centrifugar 2 mL e usar o pellet.
- Extração e Purificação:
- Adicionar tampão de lise, Proteinase K e carreador.
- Incubar, centrifugar, e aplicar nas colunas de sílica conforme protocolo detalhado.