Tripsina, EDTA, HSS, Bicarbonato de sódio 0,25% (1X) | BR30042-01

Tripsina 1:250 – 0,25% – 1X

N°. Cat.: BR30042-01

Apresentação: 100 mL

Armazenamento: -20ºC

CARACTERÍSTICAS:

Esta é uma solução equilibrada de tripsina de origem suína, livre de íons de cálcio e magnésio. O EDTA presente atua como agente quelante. Essa solução permite o descolamento de células de frascos de cultura, bem como a desagregação de células entre si devido às suas propriedades proteolíticas sobre as proteínas intercelulares, além de alterar a estabilidade das membranas ao quelar o íon cálcio.

APLICAÇÃO:

Esta solução é indicada na separação de células de órgãos e tecidos, seja de culturas em monocamadas ou camadas múltiplas. Como o processo de descolamento e separação de células geralmente é feito sob microscópio, é possível controlá-lo interrompendo sua ação com a adição de meio contendo soro animal ou humano.

COMPONENTES E CARACTERÍSTICAS FÍSICO-QUÍMICAS:

• Tripsina
• EDTA
• HBSS modificado
• Bicarbonato de sódio

Aspecto: Límpido e transparente

pH: 7,0 ± 0,2

CONSERVAÇÃO:

Descongele apenas no momento de uso, pois como é uma enzima proteolítica, pode sofrer autodigestão e perder atividade. Alterações para valores próximos de 7,9 e uso a 37ºC aumentam sua atividade, mas o oposto ocorre com diminuição de pH e temperatura.

PARA REMOVER CÉLULAS DE CULTURAS ADERIDAS AO FRASCO:

1. Remova todo o meio do frasco por inversão ou aspiração.
2. Adicione aproximadamente 0,1 ml/cm² da solução de Tripsina/EDTA para lavar a superfície das células.
3. Adicione cerca de 0,05 mL/cm² da solução sob a superfície celular e observe ao microscópio.
4. Quando as células adquirirem um aspecto redondo e individualizado, adicione 0,2 ml/cm² de meio com soro à 10% para interromper o processo.
5. Homogeneize as células para proceder com diluição, congelamento, etc.

PARA REMOVER CÉLULAS DE ÓRGÃOS OU TECIDOS:

1. Lave bem o órgão ou tecido em meio sem soro.
2. Pique o órgão em pedaços pequenos (+1mm) com uma tesoura de íris.
3. Aspire todo o sobrenadante.
4. Adicione Tripsina/EDTA em volume de 3 a 10 vezes o correspondente do tecido picotado.
5. Agite lentamente em um Erlenmeyer.
6. Após o tempo de ação da solução de Tripsina, aspire o sobrenadante e verta-o para tubos com meio completo com soro à 10%.
7. Centrifugue, despreze o sobrenadante, adicione novo meio completo, homogeneize e distribua as células em frascos de cultivo.